停止给药5天

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停止给药5天
2021-12-12 @ 08:00 - 17:00
工作安排:
1、 水合氯醛麻醉(8%,1.5ml),大鼠称重记录;
2、 静脉采血:2ml 柠檬酸钠抗凝管用于FACS 血常规分析裂红后加冻存液冻存
5ml 于血清管分血清用于血生化(ELISA)-80℃保存
3、 腹主动脉放血;
4、 BALF样本制备:
1) 打开胸腔,暴露肺;用细线结扎右主支气管;
2) 剪开颈部皮肤,钝性剥离肌肉,找到气管;(需准备剪刀,镊子,止血钳)
3) 用细线结扎近口端气管;
4) 用注射器针头刺穿气管,小心插入预制导管,进气管约1cm,用细线扎住导管以稳定;
5) 注射器吸20ml PBS缓冲液,将 PBS慢慢注入大鼠肺脏,见左肺膨起,缓慢回抽,反复5次,回收BALF至EP管,冰浴;
6) 在4 ℃下以1500 r/min离心15 min,取上清于-20 ℃冰箱保存备用,如须保存3个月以上,则需于-70℃冰箱储存;
7) 上清液用做可溶性成分(白蛋白、总蛋白、IL-6和TNF-α)的检测;
8) 细胞沉淀加入2 ml细胞冻存液,保存于-80℃冰箱,后复苏用于流式分类计数。
5、 器官组织样本
1) 大鼠处死后,用无菌眼科剪分离肺脏、心脏、肝脏、脾脏、肾脏、胸腺、睾丸;
吸取器官表面的血污后,称取器官重量,记录数据;
2) 剪取约0.2- 0.5 g准确称重后置于EP管中,保存于-20 ℃冰箱中,用于测量器官内的钨浓度。
大鼠编号:
对照组:1101-1106
实验组:2101-2106