停止给药5天

工作安排：

1、  水合氯醛麻醉（8%，1.5ml），大鼠称重记录；

2、  静脉采血：2ml 柠檬酸钠抗凝管用于FACS 血常规分析裂红后加冻存液冻存

5ml 于血清管分血清用于血生化（ELISA）-80℃保存

3、  腹主动脉放血；

4、  BALF样本制备：

1)    打开胸腔，暴露肺；用细线结扎右主支气管；

2)    剪开颈部皮肤，钝性剥离肌肉，找到气管；（需准备剪刀，镊子，止血钳）

3)    用细线结扎近口端气管；

4)    用注射器针头刺穿气管，小心插入预制导管，进气管约1cm，用细线扎住导管以稳定；

5)    注射器吸20ml PBS缓冲液，将 PBS慢慢注入大鼠肺脏，见左肺膨起，缓慢回抽，反复5次，回收BALF至EP管，冰浴；

6)    在4 ℃下以1500 r/min离心15 min，取上清于-20 ℃冰箱保存备用，如须保存3个月以上，则需于-70℃冰箱储存；

7)    上清液用做可溶性成分（白蛋白、总蛋白、IL-6和TNF-α）的检测；

8)    细胞沉淀加入2 ml细胞冻存液，保存于-80℃冰箱，后复苏用于流式分类计数。

5、  器官组织样本

1)    大鼠处死后，用无菌眼科剪分离肺脏、心脏、肝脏、脾脏、肾脏、胸腺、睾丸；

吸取器官表面的血污后，称取器官重量，记录数据；

2)    剪取约0.2- 0.5 g准确称重后置于EP管中，保存于-20 ℃冰箱中，用于测量器官内的钨浓度。

大鼠编号：

对照组：1101-1106

实验组：2101-2106