一、蛋白质-蛋白质
1.免疫沉淀(IP)
4.co-IP 和GST pull-down区别
二、蛋白质-RNA
1.蛋白质与RNA相互作用
①RNA结合蛋白
RNA结合蛋白
微小RNA结合蛋白(如,Ago2)
②RNA
2、RNA结合蛋白免疫沉淀技术(RIP)
RNA pull-down操作手册
三、蛋白质-DNA
染色质免疫共沉淀技术(ChIP)
四、蛋白质-DNA/RNA
五、荧光素酶实验
1.启动子活性研究
2.基因3’UTR区和microRNA结合实验
六、RNA-RNA Pulldown
进哥你好,我请教个问题:
pull down:可以确定目的蛋白和检测蛋白是否发生直接相互作用,但是无法得知体内真实的结合情况。
关于这段话,我用磁力珠拉了带标签的蛋白及其结合的蛋白下来,但是为什么可以确定他们是直接互作的?我以为拉下来的蛋白也是和COIP一样都是蛋白复合物。有没有相关文章可以学习一下?
你好,这个实验与Co-IP的核心差异:Co-IP依赖天然蛋白复合物的完整性,而pull down可通过以下条件破坏间接互作:
高盐浓度(如500mM NaCl)洗涤缓冲液
去垢剂(1% NP-40)破坏膜结构
梯度离心去除大分子复合物
感谢分享
发现宝藏up主,感谢分享
感谢分享!
不客气 一起学习
非常棒!感谢分享,不过貌似少了蛋白和RNA相互作用的ChIRP和CLIP两个实验
嗯嗯,谢谢建议,回头抽空补充一下