Posted on

转自ZSCI:https://mp.weixin.qq.com/s/We_Cna_aiazBbt9ETNqUdQ

一、EMSA基本概念
EMSA:凝胶迁移实验,是一种检测蛋白质和核酸序列相互结合的技术;可用于核酸与蛋白相互作用的定性和定量分析。


 

EMSA研究对象:

、EMSA实验原

三、EMSA 流程
实验设计

材料准备:荧光探针合成。目前常用的荧光标记有5(6)-FAM(羧基荧光素)、FITC(异硫氰酸荧光素)标记和 P32放射性同位素标记等。

材料准备:蛋白的纯化

材料准备:PAGE胶的配制

◆ 凝胶配制

加入凝胶

凝胶凝结

孵育电泳

添加体系

样品孵育

上样电泳

凝胶显影

四、EMSA 结果分析

五、EMSA 拓展

EMSA注意事项:

核酸探针避光存放

蛋白样品低温存放

蛋白样品加抑制剂

样品孵育充分混匀

PAGE凝胶预电泳

上样前冲洗泳道孔

EMSA实验优点:

  简单快捷:相较于CHIP和RIP,EMSA具有更简单的操作步骤,更短的实验周期,约一天内可完成。

  结果可靠:EMSA实验能较真实的模拟蛋白质与核酸在体内互作的机制与过程。数据重复性好。

EMSA实验缺点:

  通量低:EMSA一次实验仅能验证少数的核酸序列信息,通量低。CHIP和RIP实验通过目标蛋白分离以及高通量测序,可以得到海量的互作核酸序列信息。

  结果局限:EMSA基于蛋白天然构象与核酸的某一段区域结合而发生相互作用。因此不能找到具体蛋白的何种氨基酸位点或区域,与核酸的片段相互作用。

发表评论

邮箱地址不会被公开。 必填项已用*标注