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外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)是外周血中具有单个核的细胞,包括淋巴细胞、单核细胞和树突状细胞。目前外周血单个核细胞主要的分离方法是Ficoll-hypaque(聚蔗糖-泛影葡胺)密度梯度离心法。

10ml人外周血大约提取1*107PBMCs。

人外周血作为免疫系统来研究时,通常需要通过密度梯度离心去除红细胞。最常用的是利用Ficoll Paque将全血分成高于和低于1.077g/ml两种密度的组分。

外周血单个核细胞(PBMC)密度较小,位于Ficoll上层,也称为buffy coat。红细胞和包括中性粒细胞和嗜酸性粒细胞在内的多形核细胞(PMNs)密度大于1.077g/ml可被除去。嗜碱性粒细胞的密度在1.077g/ml左右,部分仍然存在于PBMC组分中。

PBMCs包括淋巴细胞(T细胞、B细胞和NK细胞)、单核细胞和DC细胞。在人类中,这些细胞群的比例在个体中有所差异。通常PBMCs中,淋巴细胞占70-90%,单核细胞占10-30%,而DC细胞则只占1 -2%。在淋巴细胞中,CD3+ T细胞占70-85%(在PBMCs中占45 – 70%),B细胞占5-20%(在PBMC中最多15%),NK细胞占5-20%(在PBMC中最多15%)。

CD3+ T细胞由CD4+ T细胞(在PBMCs中占25-60%)和CD8+ T细胞(在PBMCs中占5-30%)组成,两者比例在2:1左右。CD4+ T细胞和CD8+ T细胞可进一步分为幼稚细胞、抗原接触的中枢记忆细胞、效应记忆细胞和效应细胞亚群。

CD4+ T细胞为辅助性T细胞,根据特异性细胞因子、表面分子或转录因子可进一步分为各种功能亚群,包括调节性T细胞、Th1、Th2、Th17、Th9、Tfh和Tr1等亚型。而近年来发现CD8+ 细胞毒性T细胞的表型和功能差异非常大,也许有200种功能表型,因此对其的研究会非常复杂。

在外周血中,B细胞分为过渡期、幼稚、记忆亚群以及浆细胞。DC细胞包括浆细胞样DC细胞(pDC)和髓系衍生的DC细胞(mDC)。单核细胞可分为经典单核细胞和非经典CD16+促炎性单核细胞,后者在单核细胞中最多占10%,具有独特的功能。

人类免疫系统的研究着重于对PBMCs的表型和功能研究。为了通过PBMCs研究人的免疫系统,了解外周血中存在的细胞种类,以及其如何在组织中分化和发挥功能是很重要的。最后,熟悉细胞表面和胞内表型鉴定、以及最适合的检测方法也是非常关键的。

参考资料:https://stemexpress.com/peripheral-blood-mononuclear-cells/

6 Replies to “PBMCs中的细胞分类与比例”

  1. 您好,我想问下有关实验操作的问题。我之前提PBMC三次,第二天都出现了细胞污染的情况。换过ficoll、培养基和其他试剂,也尝试过用加P/S的PBS多洗几次细胞,也尝试过用2%P/S的完培培养细胞,但是都出现了污染的情况。我本人养过其他的细胞,基本也不会出现污染的情况。想问下有什么好的建议或者需要排查的注意事项吗?

    1. PBMC是从血中分离的,中间每一步操作和试剂都需要无菌,应该你也是这样做的,培养的时候出现污染,你其他细胞又没有问题,只能出在PBMC分离阶段。
      可以加我微信,个人简历里面有

  2. 您好,免疫小白想咨询一下PBMCs中含有类似脾脏提取的T淋巴细胞的T细胞吗?还是说PBMCs里面的T细胞是已经分化好了的。我查阅了一些文献找到有提取脾脏细胞和肿瘤细胞共培养,通过检测CD4+T细胞核CD8+T细胞来验证免疫激活,但是好像没看到有提取PBMCs做相同的实验,是否是因为PBMCs里面的T细胞已经分化好了导致的

    1. 您好,这个我没有很清楚,不过据我了解,脾脏和外周血中的T细胞亚型基本一致,都是成熟的T细胞。我做过其它T细胞活化实验,都是用PBMC,这个肯定是没有问题,同时我也查到您说的PBMC肿瘤细胞共培养体系,很多,比如Impact of high-dose rate radiotherapy on B and natural killer (NK) cell polarization in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) via inducing non-small cell lung cancer (NSCLC)-derived exosomes – PMC
      需要可以继续一起讨论,一起学习

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